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5个步骤搞定进行液相色谱仪各部件的日常维护!

1、保持贮液瓶清洁,对专用贮液瓶应定期清洗;用试剂瓶作贮液瓶时,要经常更换。

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2、定期在稀硝酸溶液中超声、清洗过滤器,保持过滤器畅通无阻。

液相色谱仪使用久了机器难免会出现各种各样的问题,有些问题是由于缺少日常的维护所致。下面跟着小编来看下各个部件如何进行日常维护。
澳门新浦京网投站网止,1、液相泵的日常维护
泵的密封圈是最易磨损的部件,密封圈的损坏可能引发漏液或剧烈压力波动;单向阀的正常工作至关重要,它若发生故障,将直接影响流速的稳定性。
日常维护应注意以下几点: ①使用LCMS级的溶剂和试剂;
②确保系统压力在正常范围;
③使用完缓冲液体系后用纯水冲洗干净,防止盐沉积,系统不运行时应存储在无缓冲液的溶液或有机溶剂中;
④密封圈按照各个生产厂商的建议定期更换。 进样器的日常维护
样品预处理对于防止进样针和进样阀堵塞至关重要。 预处理常用方法: ①超滤;
②溶剂萃取/去盐; ③固相萃取; ④灌注净化/去盐; ⑤色谱分离;
⑥甲醇或乙腈沉淀蛋白; ⑦酸水解,酶解; ⑧衍生化。 2、贮液瓶的日常维护
清洁是保持流动相贮液瓶正常使用的关键,使用LCMS级的溶剂和试剂。陈旧的流动相和用久了的试剂应定期废弃,防止生长微生物和组分改变。贮液瓶内壁定期清洗,流动相滤头定期清洗或更换。
3、样品的预处理
从保护仪器角度出发,防止固体小颗粒堵塞进样管道和喷雾针,防止污染MS,降低分析背景,排除对分析结果的干扰;从ESI电离得过程分析看,电荷聚集在液滴的表面,样品和杂质在液滴表面相互竞争,不挥发物(如磷酸盐等)妨碍带电液滴挥发,大量杂质妨碍带电样品离子气化,增加电荷中和的可能。
4、色谱柱的维护和保存
①每次工作结束,用高比例强溶剂冲洗色谱柱,冲去留在柱上的强吸附组分;
②净化样品,样品中的微粒会进入色谱柱,在柱头上沉积下来,造成柱压升高,柱效降低;
③避免撞击色谱柱,如掉落或超声震荡; ④柱压避免急剧变化;
⑤反相柱C18应保存在纯有机相或50%有机相中,一周不用要卸下,两端用堵头密封,避免干枯。
5、流动相的选择
LCMS常用的流动相为甲醇、乙腈、水和它们不同比例的混合物以及一些易挥发盐的缓冲液,如甲酸铵、乙酸铵等,还可以加入易挥发酸碱如甲酸、乙酸或氨水等调节pH值;LCMS体系要避免使用含磷或氯的缓冲液,含钠和钾的成分必须1mmol/l。(盐分太高会抑制离子源的信号和堵塞喷雾针及污染接口)含甲酸(或乙酸)2%,含三氟乙酸0.5%,含三乙胺1%,含醋酸铵10—5
mmol/l。

3、使用HPLC试剂和新蒸二次蒸馏水作流动相,所使用的溶剂其截止波长一定要低于检测波长,对不是HPLC级的试剂要进行过滤(HPLC试剂出厂前已用0.02μm滤膜过滤)。对流动相一定要脱气。

4、每天开始使用仪器,注意放空排气,确保泵头、流动池以及其它流路系统中无气泡存在。

5、珍惜保护色谱柱,避免柱头突然产生大的波动,扰动损伤柱床。如避免泵启动过速、升压过快、样品阀搬动过慢所造成的柱压大的波动。

6、采用保护柱,延长柱寿命。如污染物堆积于保护柱柱头,造成柱压升高,柱效下降,峰形变差时,卸下用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。

7、避免超负荷进样,对250×4.6mm的柱子,绝对进样量应不超过100μg。在灵敏度允许的前提下,应尽量将试样浓度降低,减少绝对进样量,这是保持HPLC柱性能持久良好的重要举措之一。

8、经常用强溶剂冲洗柱子,将柱内强保留组分及时洗脱出。反相柱用异丙醇–二氯甲烷用纯甲醇或异丙醇冲洗,时间均不少于1h。

9、做完试验,及时用适当溶剂冲洗柱子和进样阀,尤其是对过夜的柱子和进样阀,一定要用足量的水彻底洗净其中的盐类、缓冲液,再用甲醇或乙腈冲洗,并保存在乙腈中。正相柱保存在非极性有机溶剂中。

10、以硅胶为基质的柱子,如C-18、C-8等,要控制好流动相的pH值,一般不要低于2.5,不高于7.0。

11、尽量用流动相溶解样品,一是避免出现拖尾峰、怪峰,二是避免试样在系统中由于溶解度降低而析出。

12、对于阻塞或受伤严重的柱子,必要时,可卸下不锈钢滤板,超声洗去滤板阻塞物,对塌陷污染的柱床进行清除、填充、修补工作,此举可使柱效恢复到一定程度,有继续使用的价值。

13、色谱仪检测器输出与积分仪要匹配,要合理设置参数如斜率、半峰宽、阈值、AUFS值、衰减等。将适宜的进样量和合适的参数结合起来,使主峰峰高达到记录仪满量程的80%左右。

14、用HPLC分析酸碱性物质,由于吸附作用使峰开拖尾。加入改良剂可以大大改善峰形,提高积分的准确度。一般规则是:分析碱性物质,可加入10-20mmol/L三乙胺。酸碱物质混为一体,可同时加入1%的醋酸和10-20mmol/L三乙胺